俄罗斯专享会294推出的本产品是一款基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下显著特点：

产品特色

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板，操作简便。

2. 优化引物：各组分经过优化，提高了检测灵敏度。

3. 阳性对照：提供阳性对照，帮助用户有效区分假阴性样品。

4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列高度保守区域，避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. 定性与定量双重功能：可用于定性检测，也可进行定量检测，其中定量检测的线性范围至少涵盖5个数量级。

6. 充分的试剂量：产品可支持50次20μL体系下的探针法荧光定量PCR反应。

7. 限于科研使用。

使用方法

一、样本制备

使用自选方法提取纯化样品DNA。本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、标准曲线样品稀释

因阳性对照浓度较高，请在独立区域内进行稀释操作，以避免污染其他样品或试剂。

1. 标记6个离心管，命名为7，6，5，4，3，2。
2. 每管加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡，形成1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。
4. 依次在6号、5号管中加入先前稀释样品，并继续震荡，直到得到6个稀释度的标准曲线样品，均置于冰上待用。

若不需制作标准曲线，直接将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL即可。

三、试剂准备

准备N+2个qPCR管，其中N是待检样品数量，向每个PCR管中添加相应成分（具体说明请参考详细说明书）。

四、模板添加

向qPCR管中分别加入2μL模板，按阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、阳性对照的顺序加样，离心30秒后，立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放入PCR扩增仪器的相应位置，启动扩增程序，具体程序设置请参考详细说明书。

六、结果分析

1. 如果制作了标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制曲线，并推算待测样品的DNA浓度。

2. 如果未制作标准曲线，则根据Ct值进行判定：阳性对照Ct值<30且呈现典型S型曲线，阴性对照Ct值38或无Ct值，样本检测Ct值<35则为阳性，Ct值在35-38范围需要复检。

运输与保存

产品应低温运输，保存于-20℃，保存期限为一年。阳性对照需单独保存，以防污染其他试剂。

通过俄罗斯专享会294提供的检测试剂盒，保证为您的科研工作提供高效与可靠的支持。