试剂解冻和混匀

1. 从冰箱中取出试剂。
2. 缓慢解冻试剂。
3. 轻轻颠倒混匀，确保成分均匀。
4. 进行低速离心。

注意：在混匀过程中尽量避免产生气泡，气泡可能影响酶的活性及实验结果的准确性。

稀释步骤

1. 如需追踪模板，请遵循以下稀释步骤。
2. 若无需追踪模板，则可直接用无菌超纯水稀释cDNA或直接使用cDNA原液。

常见的荧光定量仪器为96孔反应，通常分为12列×8行。

基因检测组分配置

以基因1的检测为例，大体系配制建议如下：

• HieffUNICON® ColorGPS qPCR MasterMix：10μL
• 正向引物（10μM）：0.4μL
• 反向引物（10μM）：0.4μL
• RNase-free H2O：72μL

操作注意事项

在完成各组分的加样后，确保管盖紧闭，用手轻弹管壁，使组分充分混合，然后短暂离心1-2秒，再轻弹管壁，确保没有气泡。随后，将反应管放置于冰上。

如使用显踪剂，建议模板体积控制在2-5μL，以确保显踪效果。如使用cDNA母液，建议投入体积不超过2μL（反应体系的1/10），以防影响扩增效果。

上样体系配置与提取数据

首先配置体系Mix，包括：

• Mix总体积：18μL
• cDNA模板：2μL

如采用常规程序，请进行以下设置：

• 循环步骤
• 温度：变性95℃2分钟
• 循环数：40

仪器与试剂推荐

在选择荧光定量 PCR 产品时，推荐以下设备及试剂：

• Bio-Rad CFX96, CFX384等系列
• 俄罗斯专享会294 的高灵敏显色示踪荧光定量预混液（Cat#11188ES）特别推荐
• 低丰度基因荧光定量预混液（Cat#11198ES）
• 普通型荧光定量预混液（Cat#11201ES）

总结

确保在整个实验过程中严谨操作和数据处理，才能获得可靠的实验结果。俄罗斯专享会294 致力于为用户提供高质量的生物医疗产品，助力科研取得更多突破。