2019年11月,来自加利福尼亚大学旧金山分校的研究团队在Nature Medicine杂志上发表了一项关于肠道病毒感染诱发儿童急性无力脊髓炎(AFM)的重要研究。这项研究运用了PhIP-seq技术和病毒组抗原库对42名确诊AFM儿童及58名患有其他神经系统疾病的儿童脑脊液样本进行了检测,筛选出与AFM发病机制相关的病毒特异性抗体。
研究结果显示,AFM患者组中肠道病毒抗体的富集现象,通过ELISA验证了这一发现。这一研究提示肠道病毒感染可能是导致大多数AFM病例的主要原因。这为肠道病毒脑脊液抗体测定方法的快速开发提供了重要的方向,同时为未来能够有效诊断肠道病毒相关的AFM病例提供了基础。
研究背景
急性无力脊髓炎自2012年在美国首次发现以来,已有超过500名儿童受到影响。每两年一次的流行期中,与肠道病毒EV-D68型及EV-A71型同时爆发。然而,AFM的确切病因仍然不明,仅在不到50%的病例中检测到了肠道病毒,且约只有2%的AFM儿童脑脊液中能够检测到肠道病毒的核酸。这使得研究人员对AFM可能由未识别的病原体或副感染性免疫反应引起表示担忧。
研究方法
为了解释AFM的发病机制,研究团队使用PhIP-seq技术分析了AFM患儿及对照组的脑脊液中病毒抗体谱。该技术能够高通量且一次性检测数百种病毒的特异性抗体,最终通过ELISA实验对检测结果进行了验证。
主要研究结果
结果一:PhIP-seq技术全面分析AFM组儿童特有的病毒抗体反应,发现小RNA病毒(Picornaviridae科中的肠病毒)属的抗体反应在AFM患者中明显高于对照组样本。
结果二:通过数据分析发现,免疫原性抗原肽段源自肠道病毒基因组的整体蛋白质。序列分析表明,PhIP-seq技术不仅能识别已知的线性表位序列,还能发现新的线性结合表位。
结果三:用EV病毒VP1蛋白进行的ELISA验证结果显示,AFM患者组的大部分脑脊液样本中(22/26)均能检测到EV信号,且与PhIP-seq的检测结果高度一致。
技术介绍
噬菌体免疫沉淀测序(PhIP-seq)是一种高通量抗体谱检测技术,结合了高容量噬菌体展示多肽库、抗体免疫沉淀和高通量测序技术。这项技术能针对数十万种抗原进行血清抗体检测,全面绘制血清抗体谱,是免疫力研究的重要工具。
应用方向
PhIP-seq技术可广泛应用于疾病生物标志物筛选、病因学研究、免疫力解码研究、疫苗疗效评估等领域。
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